人猪流感（H1N1）病例标本采集和实验室检测指南（暂行）

512test

猪流行性感冒（ H1N1病毒）病毒的检测

所有猪流行性感冒（ H1N1病毒）疑似病例应该采集上呼吸道标本来检测猪流行性感冒（ H1N1病毒）的病毒。
推荐采集的呼吸道标本：
疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔冲洗液/吸取物。如果不能收集这些标本，可合并鼻拭子与口咽拭子。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒运输液（ VTM ） ，并立即用冰块或冰排保存或置于4 ℃ （冰箱），并马上运送至实验室。临床样品收集人员及实验室人员的感染控制指导请见相关文件。
拭子
理想的情况下，标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维 ），用铝或塑料做杆。不推荐棉拭子和木杆。不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含3毫升病毒运输液（例如，含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液） 。

临床标本储存

所有呼吸道标本应保存在4℃ ，并尽快放置在-70℃。如果没有-70℃度冰箱，标本应保存在4℃ ，但不应超过4天。

临床标本运输
临床标本应按照A类包装要求运送，并用干冰运输。
所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输。  

检测程序

呼吸道标本应首先应用real time RT-PCR方法检测A型流感病毒的M基因、Swine（ H1N1）的HA基因和NP基因，以及质控对照RNP基因。同时，接种MDCK细胞或SPF鸡胚进行病毒分离，并测定病毒的全基因组序列。

推荐的检测方法

用Real-time RT-PCR方法检测猪流行性感冒（ H1N1病毒）病毒。

其他检测方法
快速流感抗原检测
一些商用快速检测可以区分A和B型流感病毒 。快速检测实验A型流感阳性的病例符合可能病例的标准（见上文） 。这些实验对检测人感染猪流行性感冒（ H1N1病毒）病毒临床标本的敏感性和特异性未知，而且检测季节性流感病毒的灵敏度不佳。因此，快速检测阴性结果可能是假阴性，不能作为猪流感感染的最后诊断。
免疫荧光法（或装配的IFA ）
免疫荧光试验可以区分A和B型流感病毒 。检测A型流感阳性的病例符合可能病例的标准（见上文）。免疫荧光试验的结果取决于临床标本的质量，操作技能，对检测人感染猪流行性感冒（ H1N1病毒）病毒临床标本的敏感性和特异性未知。因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为猪流感感染的最后诊断。  

病毒培养
可用MDCK细胞和SPF鸡胚分离猪流感（ H1N1病毒）病毒可以诊断感染，但无法为临床诊断及时提供结果。病毒分离阴性并不能排除感染猪流感（ H1N1病毒）病毒。