重组DNA技术
大纲要求:
1.重组DNA技术概述
重组DNA技术的概念
基因工程基本原理
2.基因工程与医学
疾病基因的发现
发展新药物
DNA诊断
基因治疗
遗传病的防治
第一节 重组DNA技术概述
一、概念:
1.克隆与克隆化:
同一母本的所有副本或拷贝的集合,获取同一拷贝的过程克隆化。
2.基因工程:
用酶学的方法,体外将各种来源的遗传物质与载体DNA结合,通过转化或转染等导入宿主细胞,筛选出含有目的基因的转化子细胞。转化子细胞经扩增、提取获得大量目的DNA的无性繁殖系,即DNA克隆,又称基因克隆。
3.工具酶:如限制性核酸内切酶,DNA聚合酶、逆转录酶等
4.基因载体:如质粒
5.PCR:聚合酶链反应
6.基因文库
包括cDNA文库和基因组文库
cDNA文库:
包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部mRNA经反转录而合成的cDNA序列的克隆群体,它以cDNA片段的形式贮存着该组织细胞的基因表达信息。
基因组文库:
包含某一个生物细胞全部基因组DNA序列的克隆群体,它以DNA片段的形式贮存着某一生物的全部基因组DNA(包括所有的编码区和非编码区)信息。
二、基因重组过程:
①基因的获取
②载体选择
③基因与载体的连接
④重组子转入
⑤筛选转化子
⑥目的基因的表达