1、认真执行消毒隔离制度。按规定路线进入手术室。进更衣室前先换拖鞋，然后更衣、戴口罩、帽子，手术室内不应穿袜子或个人内衣，避免细菌扩散。
2、严格划分三个区：非限制区（污染区）、半限制区（清洁区）、限制区（无菌区）。
3、手术间物品摆放整齐，清洁无灰尘，无血迹，私人物品及书报一律不准带入手术间，严禁在手术间内做敷料打包。
4、认真执行消毒规范，按规定规格打包，下排气压力灭菌最大包体积不得超过
5、灭菌包应储存在无菌物品柜内，有效期为1周，过期应重新消毒，布类敷料包皮无残缺破损及缝补，不潮湿。
6、医务人员使用无菌物品和器械时，应检查外包装的完整性及灭菌日期。无菌包打开后虽未使用，视为污染，必须重新灭菌。
7、手术过程中，工作人员严格无菌操作，静脉输液做到一人一针一管一带。麻醉物品应当一用一消毒，一次性医疗器械、器具不得重复使用。
8、病人手术使用过的器械处理： 手术后立即清洗器械，去除器械上的血垢等污染，有关节、缝隙、齿槽的器械，应尽量张开或拆开，进行彻底洗刷，然后用流水冲净，擦干或晾干，器械消毒过程中可以在去离子水或蒸馏水中添加专用水溶性器械润滑剂。并尽快打包，以免再污染。
非传染症病人使用后的手术器械应用万福金安复合酶（本品一袋可加30°—50°温水5000mL）浸泡5分钟（延长浸泡时间或活动浸泡效果更佳，不宜用沸水泡洗）擦洗去污。
一般感染病人使用后的器械选用500mg/L有效氯消毒剂浸泡30分钟（金属器械须加防锈剂）；经血传播的疾病如艾滋病、各型肝炎等用1000mg/L有效氯消毒剂浸泡30分钟；气性坏疽、破伤风感染等用2000mg/L有效氯消毒剂浸泡30分钟后进行常规清洗消毒。
9、手术间每日定时进行紫外线空气消毒，以1、5w/m³,消毒时间为30分钟，每日2次。每月1次空气微生物监测。紫外线灯管用95%酒精擦拭，每周1次。
10、手术室手术间严格卫生、消毒制度。每日手术前和手术后进行湿式擦拭清洁消毒，墙体表面擦拭高度为2—2、
11、传染病患者的手术通知单上应注明感染诊断，其手术应当在隔离手术间进行手术。术后器械、物品及环境仪器等进行终末消毒。
12、接送病人的平车每周消毒或专人专用套；室内车、室外车分别使用；隔离病人应专车专用，用后严格消毒。
13、术后污敷料定点放置，按规定处理。手术废弃物置于黄色塑料袋，封闭运送指定地点。医务人员脱下的手术衣、手套、口罩等物品应当放入指定位置后，方可离开手术室。
14、患有上呼吸道感染或其他传染病的工作人员，应当限制进入手术室工作。
15、洁净手术间的净化空调系统应当在手术前30分钟开启，手术结束后30分钟关闭，回风口格栅应当使用竖向栅条，每天擦拭清洁一次，对新风入口过滤网，1周左右清扫一次，检查网眼是否堵塞。