执业护士护理论文指导：双单克隆抗体夹心ELISA检测IFN-α方案临床应用的探讨

【摘要】：[目的] 利用抗IFN-α单克隆抗体的高度特异性,用针对IFN-α不同表位的单克隆抗体构建ELISA方案以检测IFN-α的含量;通过一系列的方法对ELISA方案进行优化,并将稳定的实验方法用于临床标本的检测。
[方法] 实验分为三部分:(1)抗IFN-α单克隆抗体的扩增、纯化及标记的研究;(2)抗IFN-α双单克隆抗体ELISA试剂盒方案的构建;(3)抗IFN-α双单克隆抗体ELISA试剂盒的临床研究。
[结果] (1)本研究采用体内扩增法在短期内就获得了含抗IFN-α的特异性单克隆抗体的腹水,通过系列浓度梯度饱和硫酸铵初纯,透析除盐,再使用SPA-sepharose CL-4B亲和层析柱进一步纯化,得到纯化优质抗体。用ELISA检测方法确定3D_9B_(10),1A_(11)D_5,1A_(11)C_3单抗的效价可达10~4。用辣根过氧化物酶(HRP)和生物素N-羟基丁二酰胺酯(BNHS)分别对纯化抗体3D_9B_(10)进行标记,获得了HRP-3D_9B_(10),Biotin-3D_9B_(10),HRP标记率为0.593。用竞争抑制ELISA法来鉴定酶标抗体的特异性,研究结果表明随着竞争抗原浓度的增加OD_(450)值随之减少,检测结果与竞争抗原浓度成一定的反比关系,说明HRP和BNHS成功标记到抗体上。标记抗体效价分别为1∶1600和1∶3200,较标记前抗体效价有所下降。转载自『壹佰医学论文网』
【关键词】：IFN-α 单克隆抗体 EUSA 生物素 HBV
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